苹果茎沟病毒单克隆抗体的制备与应用

【摘要】苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)为梨和苹果的重要病毒病之一,对果树产量和果品质量产生严重影响,进而造成经济损失。为了构建一套快速、灵敏的ASGV检测方法,本研究制备了抗ASGV的单克隆抗体,并应用于田间样品的ASGV检测,为快该病毒的速检测提供了有效制剂。取得的研究结果如下：1.本研究以仅带有ASGV的砂梨“黄花”离体植株为毒源材料,通过汁液摩擦方法接种到西方烟(Nicotianaoccidentalis)和昆诺藜(Chenopodiumquinoa),约7d后在昆诺藜上表现为系统的褪绿斑驳和褪绿斑点,在西方烟上表现为系统的褪绿斑和坏死。以接种发病的昆诺藜为毒源,昆诺藜为繁殖寄主,进行大量转接,繁殖病毒。2.通过差速离心和蔗糖密度梯度离心的方法从100g昆诺藜叶片中获得1mL浓度约为4.29mg/mL的病毒提纯液,并通过SDS-PAGE、Westernblot和RT-PCR方法验证病毒提纯液中含有ASGV。3.用ASGV病毒提纯液通过皮下注射免疫BALB/C小鼠,取得的脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用原核表达的ASGVCP蛋白筛选阳性克隆,得到2株稳定传代且分泌抗ASGV单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过ID-ELISA检测,两株腹水抗体的效价均为1：25600；Westernblot分析表明,两株单克隆抗体特异性较强,仅与ASGV的CP有特异反应；用于检测原核表达的ASGVCP时,杂交瘤细胞株2C3和1F10细胞株制备腹水抗体的检测灵敏度分别为28ng/mL和2.8ng/mL4.利用制备的单克隆抗体,采用TAS-ELISA法对49份梨和苹果样品进行ASGV检测,发现有29份样品呈阳性,阳性率达60%,与RT-PCR检测比较,其检测结果基本一致,仅有一份样品RT-PCR检测为阳性,而TAS-ELISA检测结果为阴性。
【作者】吴晓雁；
【导师】洪霓；
【作者基本信息】华中农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】梨；苹果茎沟病毒；病毒提纯；单克隆抗体；原核表达；TAS-ELISA；

【参考文献】
[1]宋广宁.兰州市大气气溶胶的光学监测与分析[D].兰州大学,大气物理与大气环境,2013,硕士.
[2]高风波.基于扩频技术的远程声遥控系统研究[D].西北工业大学,机械电子工程,2004,硕士.
[3]张学彩.山东省民营高新技术企业创新型文化构建研究[D].济南大学,技术经济及管理,2012,硕士.
[4]王拥军,何华灿,杜永文.利用广义粗近似挖掘缺省规则[J].模式识别与人工智能,2001,03:367-371.
[5]张娟.《续唐书经籍志》著录小说资料集解[D].华中师范大学,中国古代文学,2014,硕士.
[6]周翔.港口企业绩效评价研究[D].大连海事大学,物流工程,2014,硕士.
[7]陈伟.基于移动电子商务的ZTE手机营销策略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[8]张新志.陕西省燕家河煤矿有限公司基层人员绩效考核研究[D].西北大学,高级工商管理（EMBA）（专业学位）,2014,硕士.
[9]高俊峰.包商银行微型企业贷款风险管理研究[D].内蒙古大学,工商管理,2012,硕士.
[10]曾景远.基于商业智能代理的内河港口集装箱流程优化研究[D].北京交通大学,管理科学与工程,2014,博士.
[11]郑娟.基于概念隐喻的英汉学习词典中搭配呈现优化研究[D].四川外国语大学,英语语言文学,2014,硕士.
[12]王双.基于羧酸配体在离子液体中构筑的配位聚合物的合成、结构与性质研究[D].吉林大学,无机化学,2014,硕士.
[13]林颖.城市给水管网中颗粒物与二次污染互动影响及应急处理研究[D].华侨大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[14]吴燕.中药质量控制中的中药全息指纹图谱模式识别方法的研究及应用[D].中南民族大学,药物化学,2013,硕士.
[15]王鹏.慢加急性肝衰竭患者中乙型肝炎病毒S区基因准种与疾病关系的研究[D].蚌埠医学院,内科学,2013,硕士.
[16]谭广业.论庄子对人生困境的审美超越[D].湖北大学,美学,2011,硕士.
[17]杨守斌,邸琬茗,宁文生,刘潜潜,金杨福.片状ZnO形貌对Co/ZnO催化剂性能影响[J].现代化工,2014,06:101-104.
[18]卢和银.鼎航投资管理公司西铝一号项目营销策略研究[D].吉林大学,工商管理,2014,硕士.
[19]田莉.全光式石英增强光声光谱系统光纤法珀解调技术研究[D].重庆大学,光学工程,2014,硕士.
[20]杜鹏鹏.陕北中低温煤焦油粗酚精馏与模拟[D].西北大学,化学工程,2014,硕士.
[21]黄艳.藏紫草化学成分及其抑菌活性研究[D].西南交通大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[22]韩锡林.多位数频标测量系统[J].宇航计测技术.1992(05)
[23]郑炜.血糖波动与糖尿病微血管病变相关性的研究[D].桂林医学院,内科学内分泌,2012,硕士.
[24]贺焱.群体性事件视阈下加强政府公信力建设的路径思考[D].东北师范大学,中共党史,2012,硕士.
[25]韩攀.多无人机协同任务规划技术[D].南京航空航天大学,导航、制导与控制,2013,硕士.
[26]刘岩.美国科技创新体系对我国创新型国家建设的启示[D].渤海大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[27]吴贺.多通道数字光电转换系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[28]胡国庭.浙江财经学院东方学院专职教师绩效评价体系研究[D].兰州理工大学,工商管理,2013,硕士.
[29]任里.互联网行业知识型员工全面薪酬激励分析[D].中国政法大学,企业管理,2013,硕士.
[30]康江.栅格通信网资源调度技术研究[D].河北科技大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[31]鞠晓慧.我国太阳总辐射气候学计算方法的讨论及辐射资料的均一性检验[D].南京气象学院,气象学,2004,硕士.
[32]高海燕.浅谈高等数学的教学改革[J].电子制作,2015,04:184.
[33]徐帆.无组织多视图图像的自动化三维场景重建[D].华中科技大学,2007.
[34]朱熙,范瑜,吕刚,秦伟,张晓东.单边盘式感应电机的数学模型与转矩分析[J].中国电机工程学报,2010,24:69-74.
[35]谭思荣.壳聚糖微球体内分布及载辣椒碱微球药动学研究[D].广东药学院,药剂学,2013,硕士.
[36]李德高.大功率LED可靠性快速筛选技术的研究[D].浙江工业大学,2009.
[37]王猛.民国时期绥远学校体育教育[D].内蒙古师范大学,专门史,2012,硕士.
[38]黄小鹃.东汉的河北势力研究[D].湖南师范大学,中国古代史,2013,硕士.
[39]刘志华（LadislavStanko）.个人成长与自我构念：一个团体心理教育课程对中国青少年自我构念的影响[D].复旦大学,社会学,2011,博士.
[40]李晓江,张文飞.声波方程数值反演的GR法[J].石油地球物理勘探,1995,02:201-206+291.
[41]蒋湛.面向民机数据链ATS应用的显控系统设计及实现[D].西南交通大学,计算机技术,2013,硕士.
[42]陈晓岑,周东华,陈茂银.基于逆系统方法的DGMSCMG框架伺服系统解耦控制研究[J].自动化学报,2013,05:502-509.
[43]赵伟.印鉴提取与识别技术研究[D].大连理工大学,机械电子工程,2004,硕士.
[44]杨恺,郭朝斌.多次反射折射波的传播路径研究[J].石油地球物理勘探,2012,03:379-384+353-354+518.
[45]王丽娜.不同形貌金属氧化物的水热合成及其电化学性能研究[D].西北大学,2014.
[46]李占英,王科俊,徐亮,姚丽君.混沌对角递归神经网络的船舶横摇预报方法[J].控制与决策,2012,11:1681-1684+1693.
[47]刘鹏飞.山西省农产品物流网络模式研究[D].山西财经大学,企业管理,2013,硕士.
[48]魏连启.酚醛树脂纳米复合材料及其在摩阻材料中的应用研究[D].武汉理工大学,材料学,2004,硕士.
[49]谢来斌.基于温度场和动态模量的沥青混合料车辙预估模型研究[D].西安建筑科技大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[50]刘勇.不同时期肝硬化中医证型与肝脏超微结构改变的相关性研究[D].广州中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.